PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Meça K.K.O.L., Del Puerto H.L., Rodrigues L.V., Rachid M.A., Pereira N.B., Cândido M.G.L. & Vasconcelos A.C. 2011. [Apoptosis in placental maturation of cows in different stages of pregnancy: Immunohistochemical and biochemical evidences.] Apoptose na maturação placentária de vacas em diferentes estágios de gestação: evidenciação imuno-histoquímica e bioquímica. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(8):718-722. Departamento de Patologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antonio Carlos 6627, Campus Pampulha, BeloHorizonte, MG 31270-010, Brazil. E-mail: karinameca@yahoo.com.br Apoptosis is important for placental homeostasis maintenance, and a misbalance in this process may compromise the success of pregnancy. The aim of this study is to evaluate apoptosis in bovine placental samples at different stages of pregnancy. Placentome samples from 15 healthy cows, at gestational ages of 4 (n=5), 6 (n=5) and 9 (n=5) months were collected and routinely processed for histological and immunohistochemical analysis, and for DNA isolation. Histopathology sections were stained with HE. Others were submitted to immunohistochemistry, using pro-apoptotic caspase-3 and Bax protein, and anti-apoptotic Bcl-2 specific antibodies. Isolated DNAs were processed for electrophoresis in agarose gel, for detection of internucleosomal fragmentation. Histomorphometry results demonstrated that apoptotic cells gradually increase with the advance of the gestation. Also, the DNA ladder pattern was observed in all groups. In addition, caspase-3, Bax and Bcl-2 were all expressed in the three different gestation periods. However, caspase-3 presented a higher expression in all groups, in comparison to Bcl-2 and Bax. These results confirm the importance of the apoptosis in the placental maturation. Also, these results indicated that caspase-3, Bcl-2 and Bax are involved in apoptotic activation mechanisms by mitochondrial intrinsic pathway during placental maturation, contributing for physiological cellularity and cellular turn over balance in bovine placenta.

• Apoptosis placenta apoptose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Meça K.K.O.L., Del Puerto H.L., Rodrigues L.V., Rachid M.A., Pereira N.B., Cândido M.G.L. & Vasconcelos A.C. 2011. [Apoptosis in placental maturation of cows in different stages of pregnancy: Immunohistochemical and biochemical evidences.] Apoptose na maturação placentária de vacas em diferentes estágios de gestação: evidenciação imuno-histoquímica e bioquímica. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(8):718-722. Departamento de Patologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antonio Carlos 6627, Campus Pampulha, BeloHorizonte, MG 31270-010, Brazil. E-mail: karinameca@yahoo.com.br Apoptose tem um papel importante na manutenção da homeostase placentária, e o desequilíbrio desse processo pode comprometer a gestação. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrencia de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentes fases de gestação. Amostras de placentomos de 15 vacas saudáveis com 4 (n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestação foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imuno-histoquímica e isolamento de DNA. As lâminas obtidas foram coradas em HE, ou submetidas à análise imuno-histoquímica das proteínas pró-apoptóticas caspase-3 e Bax, e da proteína anti-apoptótica Bcl-2. O DNA isolado foi submetido à eletroforese em gel de agarose para detecção da fragmentação internucleossômica do genoma. Os resultados de histomorfometria revelaram que as células apoptóticas aumentaram progressivamente com o avanço da gestação. Confirmou-se a apoptose pela fragmentação característica do DNA genômico, visualizada pelo clássico “padrão em escada” na eletroforese em gel de agarose. Adcionalmente, a imunoexpressão de caspase-3, Bax e Bcl-2 foram observadas em todas as amostras. Entretanto, a proteína caspase-3 apresentou marcação mais intensa em todos os tempos gestacionais, quando comparada com a marcação das proteínas Bcl-2 e Bax. Esses resultados confirmam e reforçam a importância da apoptose na maturação placentária. Além disto, indica que caspase-3, Bax e Bcl-2 estão envolvidas nos mecanismos de ativação da apoptose pela via intrínseca mitocondrial ao longo da gestação, contribuindo para o equilíbrio fisiológico da celularidade e renovação celular na placenta bovina.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Del Puerto H.L., Vasconcelos A.C., Moro L., Alves F., Braz G.F. & Martins A.S. 2010. Canine distemper virus detection in asymptomatic and non vaccinated dogs. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(2):139-144. Departamento de Patologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Campus Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: helendelpuerto@hotmail.com A quantitative real time polymerase chain reaction (PCR) revealed canine distemper virus presence in peripheral blood samples from asymptomatic and non vaccinated dogs. Samples from eleven domestic dogs with no signs of canine distemper and not vaccinated at the month of collection were used. Canine distemper virus vaccine samples in VERO cells were used as positive controls. RNA was isolated with Trizol®, and treated with a TURBO DNA-free kit. Primers were designed for canine distemper virus nucleocapsid protein coding region fragment amplification (84 bp). Canine b-actin (93 bp) was utilized as the endogenous control for normalization. Quantitative results of real time PCR generated by ABI Prism 7000 SDS Software showed that 54.5% of dogs with asymptomatic canine distemper were positive for canine distemper virus. Dissociation curves confirmed the specificity of the real time PCR fragments. This technique could detect even a few copies of viral RNA and identificate subclinically infected dogs providing accurate diagnosis of this disease at an early stage.

• Cinomose cinomose canina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Del Puerto H.L., Vasconcelos A.C., Moro L., Alves F., Braz G.F. & Martins A.S. 2010. Canine distemper virus detection in asymptomatic and non vaccinated dogs. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(2):139-144. [Detecção do vírus da cinomose canina em cães assintomáticos e não vacinados.]Departamento de Patologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Campus Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: helendelpuerto@hotmail.com A reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real revelou a presença do vírus da cinomose canina em amostra de sangue de cães assintomáticos e não vacinados. Amostra de onze cães domésticos sem nenhum sinal clínico de cinomose e que não foram vacinados no mês da coleta de sangue foram utilizados para análise. Amostra vacinal do vírus da cinomose canina em células VERO foi utilizada como controle positivo. O RNA total foi isolado utilizando-se Trizol®, e tratadas com o Kit TURBO DNA-free. Os iniciadores foram desenhados para amplificar a região do nucleocapsídeo viral com 319pb e 84pb para a PCR convencional e PCR em tempo real, respectivamente. O fragmento alvo da b-actina canina com 93pb foi utilizado como controle endógeno e normalizador. Resultados quantitativos da PCR em tempo real gerados pelo programa ABI Prism 7000 SDS demonstraram que 54,5% dos cães assintomáticos foram positivos para o vírus da cinomose canina. As curvas de dissociação confirmaram a especificidade dos fragmentos da PCR em tempo real. A detecção precoce do RNA viral é importante para a identificação de cães subclinicamente infectados e limitar a difusão da doença.